Forskel mellem Benzonase og DNase | Benzonase vs DNase

nøgle Forskel - Benzonase vs DNase

Nedbrydning af nukleinsyrer er vigtig for mange molekylærbiologiske teknikker. Det anvendes meget i rekombinant DNA teknologi til at slippe af med uønskede fragmenter af DNA og RNA. Nukleinsyre nedbrydende enzymer kaldes nukleaser, og de kan være af forskellige typer baseret på den nødvendige funktion. Nukleaser, der nedbryder DNA, er kendt som DNaser, hvorimod dem der nedbryder RNA er kendte RNaser. Disse enzymer anvendes mest i in vitro forsøg, hvor i vitro molekylære tests udføres for at isolere rent DNA, RNA eller proteiner. Benzonaser er en type nukleaser, der nedbryder både DNA og RNA, mens DNaser nedbryder kun DNA. Dette er nøgleforskellen mellem Benzonase og DNase.

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel

2. Hvad er Benzonase

3. Hvad er DNase

4. Ligheder mellem Benzonase og DNase

5. Sammenligning ved siden af hinanden - Benzonase vs DNase i tabelform

6. Sammendrag

Hvad er Benzonase?

Benzonase er en genetisk manipuleret endonuclease fra Serratia marcescens. Dette enzym produceres i E. coli værter i industriel skala. Benzonase er i stand til at spalte dobbeltstrenget DNA, lineært DNA, cirkulært DNA og enkeltstrenget RNA. Benzonase er således kommercielt vigtig. Benzonase enzym er et protein dimer, som har 245 identiske aminosyrer, ~ 30 kDa subunits med to essentielle disulfidbindinger. Benzonase spalter nukleinsyrer ved dens 5'-ende og resulterer i fragmenter med frie 5'end. Benzonase kan spalte nukleinsyrer i en hvilken som helst rækkefølge, men foretrækker GC-rige regioner.

Benzonase opbevares ved -20 ⁰ C. Den optimale pH for enzymaktivitet er fundet at være 8. 0-9. 2. Applikationerne af Benzonase indbefatter prøvepræparation til protein 2D-gelelektroforese, hvor Benzonase fjerner bundne nucleinsyrer og fjernelse af nukleinsyreforurenende stoffer fra rekombinante proteinpræparater. Det bruges også til at reducere viskositeten af proteinekstrakter og forhindre klumping af celler i en celleblanding.

Hvad er DNase?

DNase er et nuklease, hydrolytisk enzym, der kun er i stand til at spalte dobbeltstrenget DNA. Der er to hovedtyper af DNaser: DNase I og DNase II. DNase Jeg deltager i spaltning af dobbeltstrenget DNA for at fremstille polynukleotider med 5'-frie ender. DNase II er involveret i spaltning af dobbeltstrenget DNA til fremstilling af polynukleotidstrenger med 3'-frie ender eller overhæng.

DNase I

DNase I virker ved en optimal pH mellem 7-0-8. Enzymeaktiviteten afhænger af mange ioniske cofaktorer, som omfatter Ca ²⁺ , Mg ^{2 +} eller Mn ²⁺ . Aktiviteten af Mg ²⁺ og Mn ²⁺ bestemmer funktionen af DNase I. I nærvær af Mg ²⁺ spalter DNase I hver streng af dsDNA uafhængigt. Dette foregår tilfældigt. I modsætning hertil spalter enzymet i nærvær af Mn ^2+, begge DNA-tråde på omtrent det samme sted. Denne spaltning vil resultere i produktion af to typer af DNA-fragmenter; en type med stumme ender og en anden type med et eller to nukleotidoverhæng.

Figur 02: DNase

DNase II

DNase II-funktioner ved en optimal pH på 4. 5-5. 0 og divalente metalioner er nødvendige for dets aktivitet, svarende til DNase I. Mekanismen af DNase II er kendt for at bestå af tre hovedtrin.

Multiple enkeltstrengspauser induceres i DNA-rygraden.
Syreopløselige nukleotider og oligonukleotider fremstilles.
Ikke-lineært hyperkromisk skift forekommer i den sidste fase.

DNase enzymets primære inhibitorer indbefatter metalchelatorer, overgangsmetaller og kemikalier, såsom natriumdodecylsulfat og β-mercaptoethanol.

De vigtigste anvendelser af DNase omfatter fremstilling af DNA-fri RNA-ekstrakter og proteinekstrakter og fjernelse af template DNA under in vitro transkriptionsforsøg.

Hvad er lighederne mellem Benzonase og DNase?

Begge er hydrolytiske enzymer.
Begge er nucleaser.
Begge deltager ved at spalte phosphodiesterbindingerne af nukleinsyrer.
Begge kræver en optimal pH- og opbevaringstemperatur for at opretholde enzymets aktivitet.
Inhibitorer af enzymer indbefatter chelateringsmidler, overgangsmetaller og detergentkemikalier.
Applikationer er primært fokuseret på at opnå høje renhedsekstrakter af DNA, RNA og proteiner.
Begge enzymer kan produceres via genteknologi.

Hvad er forskellen mellem Benzonase og DNase?

Benzonase er et enzym, der er i stand til at spalte dobbeltstrenget DNA, lineært DNA, cirkulært DNA og RNA.

DNase er et enzym, som er i stand til at spalte dobbeltstrenget DNA.
Substrat for enzymet	Både DNA og RNA er substrater for benzonase.
DNA er substratet for DNase.
Struktur	Optimalt pH-interval af Benzonase er 7-0-8. 0
Optimale pH-værdier af DNase I er 7. 0-8. 0 og DNase II er 4. 5 - 5. 0.
Sammendrag - Benzonase vs DNase	Nukleaseenzymer anvendes meget i forskellige forsøgsprocedurer med hensyn til molekylærbiologi og genteknologi. Benzonase og DNase er to typer nukleaser. Benzonase er involveret i nedbrydning af både DNA og RNA, medens DNase er involveret i spaltning af dobbeltstrenget DNA. Dette er den grundlæggende forskel mellem benzonase og DNase. På nuværende tidspunkt produceres begge disse nukleasetyper gennem rekombinant DNA-teknologi, som giver en højere kvalitet af enzymer, som er optimeret til maksimal produktion.

Download PDF Version af Benzonase vs DNase

Du kan downloade PDF-versionen af denne artikel og bruge den til offline formål som pr. Citat notat. Download venligst PDF-version her Forskel mellem Benzonase og DNase

Referencer:

1. "Deoxyribonuclease I fra bovin pancreas D5025. "Sigma-Aldrich, tilgængelig her. Tilgænges 19 september 2017.

2. "Deoxyribonuclease II. "Deoxyribonuclease II - Worthington Enzyme Manual, tilgængelig her. Tilgængelig 19 september 2017.

Billedrettighed:

1. "DNA-hypersensitivt sted" af Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. (2012) Korrelation mellem DNase I Overfølsom sitefordeling og genekspression i HeLa S3-celler. PLoS ONE 7 (8): e42414. doi: 10. 1371 / journal. pone. 0042414 (CC BY-SA 2. 5) via Commons Wikimedia