Forskel mellem kloning og subkloning | Kloning vs subkloning

nøgleforskel - kloning vs subkloning

Kloning og subkloning er molekylære biologiske procedurer, der skaber genetisk identiske celler eller organismer, der bærer det DNA eller gen, som er af interesse. Kloning er en teknik, der involverer indsættelse af det interesserede gen eller DNA i en vektor, replikation af det inden for en værtsbakterie og produktion af celler eller organismer, som er nøjagtige kopier af den genetiske makeup. Subkloning er en teknik, der involverer indsættelse af genet af interesse, som allerede er indsat i en vektor, i en sekundær vektor, replikation af det inden for en værtsbakterie og fremstilling af genetisk identiske kopier af celler eller organismer. Hovedforskellen mellem kloning og subkloning er, at i kloning, genen af ​​interesse, når den først ligeres i en vektor, fortsætter kloningsprocessen, mens det allerede klonede gen af ​​interesse er adskilt fra forældervektoren og i subkloningen indsættes igen i en modtagervektor og fortsætter processen .

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel

2. Hvad er Cloning

3. Hvad er Subkloning

4. Side ved side sammenligning - Kloning vs subkloning

5. Sammendrag

Hvad er kloning?

Kloning er den procedure, der producerer genetisk identiske organismer eller celler. I naturen sker kloning i form af aseksuel reproduktion. Når der ikke er genetisk rekombination eller ændring, modtager datterceller samme genetiske makeup af moderen. Prokaryote og eukaryote organismer skaber kloner ved binær fission, spirende, mitose osv. I molekylærbiologi er kloning af gener eller specifikke fragmenter af DNA en populær metode til at studere strukturen og funktionen af ​​den pågældende DNA-sektion.

Hovedmålet med molekylær kloning er at lave millioner af kopier af genetisk identiske celler eller organismer, der bærer DNA-fragmentet af interesse (hovedsageligt gener). Det skaber organismer med nøjagtige genetiske kopier af en anden. Primært klones specifikke gener i molekylære undersøgelser for at opnå strukturel og funktionel information og til DNA-sekventering. Til fremstilling af specifikke proteiner eller produkter i stor målestok anvendes også kloning i vid udstrækning.

Kloningsprocedure

De grundlæggende trin i kloningsproceduren er som følger.

1. Identifikation og isolering af genet af interesse. (Amplifikation af genet af interesse ved PCR).
2. Restriktionsfordøjelse af genet af interesse (Restriktionsendonuclease skåret genet).
3. Restriktionsfordøjelse af vektor DNA.(Vector DNA skæres også under anvendelse af den samme restriktionsendonuklease).
4. Indføring af genet i vektoren og dannelse af det rekombinante molekyle.
5. Transformation af den rekombinante vektor til en værtsbakterie.
6. Isolering og identifikation af de transformerede bakterier (plasmidvektor skal indeholde et selekterbart gen, oftest et antibiotikaresistensgen for screen-transformerede bakterier).
7. Rekombinant genekspression i værten.

Figur_01: Kloningsprocedure

Hvad er Subkloning?

Subkloning er en procedure til at flytte et gen af ​​interesse fra en vektor til en anden vektor for at se ekspressionen af ​​genet for at opnå den ønskede funktionalitet af genet. I denne metode er to vektorer involveret; nemlig forældrevektor og destinationsvektor. Klonede indlæg flyttes igen til en anden vektor i subkloning. Formålet med at overføre genet fra den første vektor til den anden vektor er at opnå noget, der ikke kunne udføres af den første vektor eller at adskille et gen igen inden for det allerede klonede fragment af DNA og udtrykke det alene. Restriktion enzymer anvendes i denne procedure i begyndelsen.

Subkloningsprocedure

De grundlæggende trin i subkloning er som følger.

1. Ved hjælp af restriktionsendonukleaser separeres DNA'et af interesse i donorplasmidet (modervektor).
2. Amplifikation af DNA'et af interesse ved anvendelse af PCR.
3. Oprensning af PCR-produktet (DNA af interesse) ved gelelektroforese.
4. Åbning af recipientplasmidet med samme restriktionsendonucleaser anvendt til at separere DNA af interesse i moderplasmidet.
5. Ligning af DNA af interesse (gen) i recipientplasmidet for at danne det subklonede plasmid.
6. Transformation af den subklonede vektor til en kompetent værtsbakterie.
7. Screening af transformerede celler.
8. Oprensning af plasmid-DNA'et og anvendelse til DNA-sekventering eller ekspression af generne for at opnå de ønskede produkter.

Subkloning udføres ved lejligheder til isolering af et gen fra den klonede gruppe af gener eller når det gen, der er af interesse, skal overføres til et nyttigt plasmid for at se den nøjagtige funktion af genet af interesse.

Figur_02: Subkloningsprocedure

Hvad er forskellen mellem kloning og subkloning?

- diff Artikel Mellem før tabel ->

Kloning vs Subkloning
Kloning er den procedure, der producerer genetisk identiske organismer eller celler.	Subkloning er en procedure til at flytte et gen af ​​interesse fra en vektor til en anden vektor for at se ekspressionen af ​​genet for at opnå den ønskede funktionalitet af genet.
Proces
Separér DNA'et af interesse fra organismen og indsættes i en vektor en gang og klonet	Already klonet DNA skilles fra den første vektor og indsættes i en anden vektor og klones.
Indsæt bevægelse via vektorer
Flytter ikke indsatser (DNA af interesse) fra en vektor til en anden vektor.	Flyt indsatser fra forældrevektor til destinationsvektor.

Sammendrag - Kloning vs Subkloning

Kloning skaber genetisk identiske celler eller organismer med det indsatte gen eller DNA af interesse.Det fortsætter gennem adskillelsen og indsættelsen af ​​DNA af interesse i en vektor og ekspression i en værtsbakterie. Subkloning deler lignende trin med kloning. I subkloning indsættes imidlertid allerede klonet DNA-fragment (gen af ​​interesse) i en vektor og transformeres til en værtsbakterie. Det er nøgleforskellen mellem kloning og subkloning.

Referencer

1. Lodish, Harvey. "DNA-kloning med plasmidvektorer. "Molecular Cell Biology. 4. udgave. U. S. National Library of Medicine, 01 jan. 1970. Web. 05 mar. 2017
2. "Subkloning. "Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14. februar 2017. Web. 06 Mar. 2017
3. "Subkloning. "Subkloning | Open Access artikler | Open Access-tidsskrifter | Konferenceproceedings | Redaktører | Forfattere | Reviewers | videnskabelige begivenheder. N. p., n. d. Web. 06 Mar. 2017
4. Wackerhage, Henning. "Sådan subclone. "Sådan subclone. N. p., 01 jan. 1970. Web. 06 Mar. 2017

Image Courtesy

1. Molecular Cloning Procedure - Ved CNX OpenStax [CC BY 4. 0], via Wikimedia Commons
2. Subkloningsprocedure - Af Den originale uploader var Takometer på engelsk Wikipedia (Overført fra en. wikipedia til Commons.) [CC BY 2. 5], via Wikimedia Commons