Forskel mellem valgbar markør og reportergen | Valgbar Marker vs Reporter Gene
Nøgleforskel - Selekterbar markør vs Reportergen
Geneteknikkersteknik bruges til at overføre vigtige gener fra organisme til anden organisme. Indsættelse af et fremmed gen i en anden organismer genom og gør det udtrykt i værtscellen er sværeste trin i genoverførsel. For at detektere succesen af transformationsprocessen, anvendes en selekterbar markør og et reportergen i det rekombinante molekyle. En selekterbar markør er en DNA-sekvens eller et gen, der udtrykker og selekterer de transformerede celler fra de ikke-transformerede celler. Et reportergen er et andet gen, der bruges til at skelne mellem transformerede celler og at kvantificere eller detektere, hvordan det indsatte gen fungerer inden for værten. Nøgleforskellen mellem selekterbar markør og reportergen er, at den selekterbare markør anvendes til at screene de ikke-transformerede celler og signalere de transformerede celler, mens reportergen anvendes til at kvantificere niveauet af genekspression i værten.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er Selectable Marker
3. Hvad er Reporter Gene
4. Side ved side sammenligning - Valgbar markør vs Reportergen
5. Sammendrag
Hvad er en valgbar markør?
I geneteknik indsættes genet af interesse i en egnet vektor og transformeres til værtsorganismer. Imidlertid er transformationen kun succesfuld i de kompetente værtsceller, og der er en mulighed for, at værtsceller afviser optagelsen af fremmed DNA. Derfor er differentiering af de transformerede og ikke-transformerede celler vigtige for at fortsætte med yderligere forsøg. Derfor indbefatter forskere et selekterbart markørgen til vektor til let udvælgelse af de transformerede celler fra ikke-transformerede celler. En selekterbar markør er en DNA-sekvens, især et gen, der er anvendeligt til identifikation af de transformerede celler. Dette markørgen udviser et træk, der passer til et kunstigt udvalg af transformerede celler fra ikke-transformerede celler på et medium.
Mest almindelige selekterbare markører anvendt i molekylærbiologi er antibiotikaresistente gener. Et antibiotikaresistensgen indsættes i vektoren og transformeres til værtsceller især til værtsbakterien. Det pågældende antibiotikum er inkorporeret i bakteriens vækstmedium. På grund af tilstedeværelsen af den selektive markør kan under de selektive betingelser kun celler, som indeholder den passende selekterbare markør, overleve.Ikke-transformerede celler kan ikke vokse i det antibiotikumholdige medium. På grund af den selekterbare markør, som er resistent over for antibiotika, er der således let identificerede transformerede celler.
Gener, der giver træk til antimetabolitter, herbicider anvendes som selektive markører i kloningsvektorer inden for plantegeneteknik. Denne cotransformation af selektive markører i genetisk modificerede organismer har imidlertid negative virkninger for miljøet og mennesket. Frigivelsen af antibiotikaresistente bakterier kan øge antibiotikaresistiviteten af humane patogener. Det kan kontaminere produktet eller biomassen med antibiotika og kan miste det selektive tryk som følge af nedbrydning og inaktivering af antibiotika.
Figur 01: Plasmidvektor til genoverførsel med selekterbar markør
Hvad er et Reportergen?
Reportergener er gener, der gør det muligt at påvise eller måle det indsatte genekspression. Disse reportergener kan bindes til regulatoriske sekvenser af genet af interesse for at signalere ekspressionsstedet eller niveauerne. Under transplantationen af gener under den samme promotor transskriberes de derfor i en enkelt mRNA-sekvens og translateres derefter til et protein, som kan indikere niveauet af genekspression.
Reportergener er af forskellige typer, og de indeholder visuelt identificerbare egenskaber, som normalt er involveret i fluorescerende og luminescerende proteiner. Gener, som koder for fluorescerende protein og enzymer, konverterer usynlige substrater til luminescerende eller farvede produkter ved at signalere den succesfulde genekspression og give mulighed for kvantificering af genekspression.
Figur 02: Reportergenekspression
Hvad er forskellen mellem selekterbar markør og reportergen?
- diff Artikel Mellem før tabel ->
Valgbar markør vs Reporter Gene |
|
| Valgbar markør er en slags DNA-sekvens, som hjælper med at skelne transformerede celler med ikke-transformerede celler. | Reportergen er et gen, som hjælper med at kvantificere ekspressionen af det ønskede gen indsat i værtscellen. |
| Naturenheder produceret | |
| Gen er kodet med egenskaber, der hjælper med kunstigt udvælgelse på voksende medier. | Gener er kodet med visuelt identificerbare egenskaber. |
| Anvendelse | |
| Antibiotikaresistensgener, antimetabolitgener, herbicidresistensgener osv. Er eksempler på selekterbar markør. | Generalkode for grønt fluorescerende protein, β-glucuronidase, chloramphenicolacetyltransferase, rødt fluorescerende protein, etc. er eksempler. |
Sammendrag - Valgbar markør vs Reporter Gene
Valgbare markører tillader, at transformerede celler vokser i selektive medier doseret med særligt antibiotikum eller herbicid. De bruges til tidlig udvælgelse af transformerede celler. Reportergener bruges til at kvantificere ekspressionsniveauet for det ønskede gen indsat. De tillader også differentiering af transformerede og ikke-transformerede celler. Dette er forskellen mellem selekterbar markør og reportergen.Både valgbar markør og reportergen betragtes som vigtige markører inden for genteknologi.
Referencer:
1. Ziemienowicz, Alicja. "Plantevalgbare markører og reportergener. ”SpringerLink. Springer-Verlag, n. d. Web. 23. marts 2017.
2. Shih, Chen-Han, Hsiao-Yin Chen, Hung-Chieh Lee og Huai-Jen Tsai. "Lilla kromoproteingen tjener som en ny markeringsmarkør til transgenese af Microalga Nannochloropsis oculata. "PLOS ONE. Public Library of Science, n. d. Web. 25. marts 2017
Billede Courtesy:
1. "Plasmid med insert" Af Michael Jeltsch - Egent arbejde (CC BY-SA 4. 0) via Commons Wikimedia
2. "Reporter gen" Ved TransControl på en. wikipedia (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia
