Forskel mellem direkte og indirekte ELISA | Direkte vs Indirekte ELISA

Nøgleforskel - Direkte vs Indirekte ELISA

En enzymbundet immunoassay (ELISA), også kendt som enzymimmunoassay, er en serologisk test, der registrerer antistoffer i blodet . Det bruges som et diagnostisk værktøj for at finde ud af om patienten har været udsat for en bestemt type virus eller et andet infektiøst middel (antigen), og om kroppen har produceret antistoffer mod infektionen. ELISA kan også identificere tidligere og nuværende infektioner. Derfor bruges ELISA ofte som en prescreening test af lægerne forud for dybtgående analyse af sygdomme. Denne test kan udføres i laboratoriet ved at tage en blodprøve fra patienten. Der er to typer ELISA-test: direkte ELISA og indirekte ELISA. Hovedforskellen mellem direkte og indirekte ELISA er, at indirekte ELISA er mere følsom og kræver tilsætning af et sekundært antistof , mens direkte ELISA er mindre følsom og kun bruger et primært antistof .

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel

2. Hvad er Direct ELISA

3. Hvad er Indirekte ELISA

4. Side ved side sammenligning - Direkte vs Indirekte ELISA

5. Sammendrag

Hvad er Direct ELISA?

ELISA er en sygdomsdiagnostisk test udført for at identificere tilstedeværelsen af bestemte antigener eller antistoffer i blodet. Det er gjort som en pladeanalyse. Det bruger antistoffer forbundet med let analyserede enzymer. Antigenens tilstedeværelse i serumprøven binder med specifikke antistoffer forbundet med enzymer. I det sidste trin tilsættes et specifikt substrat for at reagere med enzymet. Enzymet omdanner substratet til et farvet eller signalproducerende produkt. Farveændringen i det kemiske substrat afslører tilstedeværelsen af et bestemt antistof i serumprøven. Direkte ELISA-test bruger kun et primært antistof forbundet med enzymet. Ved binding til antigenet ændrer det hurtigt farven, hvilket indikerer tilstedeværelsen af det infektiøse middel i blodet. Imidlertid er intensiteten af signalerne svagere i direkte ELISA, da epitoperne er begrænset til binding af antigenerne. Derfor er direkte ELISA mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA.

Figur 01: Direkte ELISA-test

Hvad er indirekte ELISA?

ELISA kan udføres ved anvendelse af to typer af antistoffer nemlig; primært antistof og sekundært antistof. Indirekte ELISA-værktøj bruger begge typer af antistoffer til at forstærke signalerne til bedre detektion. Indirekte ELISA-teknik udføres som følger.

Plader inkuberes med antigener og vaskes for at blokere ikke-specifik binding.
Derefter tilsættes primære antistoffer og vaskes.
Enzymbundet sekundært antistof tilsættes og vaskes.
Et substrat tilsættes og får reagere med enzymer.
Signaler detekteres, og tilstedeværelsen eller fraværet af det specifikke antigen i prøven er identificeret.

I indirekte ELISA-test kan flere sekundære antistoffer binde til et enkelt primært antistof. Sekundære antistoffer er forbundet med let analyserede enzymer. Derfor kan en binding gøre et stærkt signal på grund af mere end en interaktion. Derfor er indirekte ELISA mere følsom end direkte ELISA. Imidlertid kan indirekte ELISA lave uspecifikke signaler på grund af krydsreaktioner af de sekundære antistoffer.

Figur 02: Indirekte ELISA-test

Hvad er forskellen mellem direkte og indirekte ELISA?

- diff Artikel Mellem før tabel ->

Direkte vs Indirekte ELISA
Direkte ELISA er mindre følsom i forhold til indirekte ELISA.	Indirekte ELISA er mere følsom.
Tid taget
Direkte ELISA-test er en hurtig proces.	Indirekte ELISA er tidskrævende.
Anvendelse af antistoffer
Kun én type antistoffer (primære antistoffer) anvendes i direkte ELISA.	Primær og sekundær antistoffer anvendes til indirekte ELISA.
Link til enzymer
Primære antistoffer er forbundet med enzymer.	Sekundære antistoffer er forbundet med enzymer.
Andre antistoffers tværreaktivitet
Direkte ELISA eliminerer krydsreaktiviteten af andre antistoffer.	Indirekte ELISA påvirkes af tværreaktivitet af anden antistof.
Signaler
Signaler er svage i forhold til indirekte ELISA.	Signaler forstærkes i indirekte ELISA. Det er derfor let at opdage.

Sammendrag - Direkte vs Indirekte ELISA

ELISA er en biokemisk teknik, der hovedsagelig anvendes i immunologi til at detektere tilstedeværelsen af et antistof eller et antigen i en blodprøve af en patient. Det kan udføres via to processer kendt som direkte eller indirekte ELISA. Direkte ELISA-test bruger kun primære antistoffer til at detektere antigenet, mens indirekte ELISA bruger både primære og sekundære antistoffer. I direkte ELISA er primære antistoffer mærket, mens der i indirekte ELISA sekundære antistoffer er mærket. Dette er forskellen mellem direkte og indirekte ELISA.

Referencer

1. "Det enzymbundne immunosorbentassay (ELISA). "Bulletin of World Health Organization. U. S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29. marts 2017

2. Loon, A. M van, J.T. Van Der Logt, F.W. Heessen og J. Van Der Veen. "Enzymbundet immunosorbent-assay, der anvender mærket antigen til påvisning af immunoglobulin M- og A-antistoffer i toxoplasmose: sammenligning med indirekte immunofluorescens og dobbelt-sandwich-enzymbundet immunosorbentanalyse. "Journal of Clinical Microbiology. U. S. National Library of Medicine, juni 1983. Web. 29. marts 2017

Billede Courtesy:

1. "ELISA diagram" Af Cavitri - eget arbejde (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia

2. "Indirekte ELISA" Af Cawang - eget arbejde (CC0) via Commons Wikimedia