Forskel mellem nitrocellulose og PVDF | Nitrocellulose vs PVDF

Nøgleforskel - Nitrocellulose vs PVDF

Western blotting er en metode, der tillader detektion og kvantificering af specifikke proteiner fra en proteinprøve. Teknologiens pålidelighed afhænger af udvælgelsen af ​​en korrekt membran til absorption af proteiner fra gelen. Der er forskellige typer mikroporøse membraner. Nitrocellulose og PVDF membraner er to sådanne membraner foretrukket af forskerne på grund af deres særlige egenskaber over de andre typer membraner. Udvælgelsen mellem nitrocellulose eller PVDF er også en anden udfordring i western blotting. Både nitrocellulose og PVDF har en høj proteinabsorptionskapacitet. Nøgleforskellen mellem nitrocellulose og PVDF-membran er, at nitrocellulosemembraner ikke har evnen til at afskaffe antistoffer og genbruge membranen til antistofreprobering, mens PVDF-membraner har strippnings- og genbrugsmuligheder .

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel

2. Hvad er nitrocellulose

3. Hvad er PVDF

4. Side om side Sammenligning - Nitrocellulose vs PVDF

5. Sammendrag

Hvad er Nitrocellulose?

Nitrocellulose er en polymer fremstillet ved behandling af cellulose med salpetersyre og anvendes til fremstilling af mikroporøse membraner i molekylærbiologi, især til blottingsteknikker såsom sydlig, nordlig og vestlig blotting. Porestørrelser af nitrocellulosemembraner varierer fra 3 til 20 μm. Nitrocellulose mikroporøse membraner letter detektion af immunokemisk reaktion der sker på overfladen af ​​membranen. Derfor anvendes nitrocellulosemembraner ofte til immobilisering af proteiner og påvisning af specifikke proteiner i western blotting. Nitrocellulose membraner kan også immobilisere glycoproteiner og nukleinsyrer.

Nitrocellulose membraner foretrækkes i lateral flow analyser på grund af flere egenskaber. Nitrocellulose membraner absorberer proteiner ved en høj koncentration. Opløsningsmidlet anvendt til at vådte membranen mindsker ikke nitrocellulosemembranproteinabsorptionen. Nitrocellulose membraner kan let skæres til den ønskede gelstørrelse og overføre proteiner fra gelen til membranen ved elektrisk eller kapillær overførsel. Nitrocellulose tillader hurtigere flow af proteiner gennem membranen med højt bindingspotentiale. Nitrocellulose viser en forbedret styringsstyrke. En anden speciel egenskab af nitrocellulosemembran er, at den let kan limes med ikke-opløsningsmiddel vandfaste klæbemidler på forskellige plastikunderlag.

Figur 01: Nitrocellulosemembran til western blotting

Hvad er PVDF?

Polyvinylidendifluorid (PVDF) er fluoropolymer fremstillet ved polymerisation af vinylidendifluorid og har en høj immobiliseringsevne af proteiner. Derfor anvendes mikroporøse membraner fremstillet af PVDF i western blotting teknikker til at analysere specifikke proteiner fra blandinger af proteiner. PVDF-membraner kan også anvendes til aminosyreanalyse og proteinsekvensering. Den vigtigste egenskab ved PVDF membran over nitrocellulosemembran er, at den let kan fjernes fra antistofferne og genanvendes til efterfølgende antistofprober.

PVDF membraner er tykkere end nitrocellulose membraner; dermed mere modstandsdygtig over for skader under genbrug. PVDF membraner er meget hydrofobe. Derfor skal de blødgøres i methanol eller isopropanol før brug.

Hvad er forskellen mellem nitrocellulose og PVDF?

- diff Artikel Mellem før bord ->

Nitrocellulose vs PVDF
Nitrocellulose er en polymer sammensat af cellulose.	PVDF er en fluorpolymer fremstillet ved polymerisation af vinylidendifluorid.
Membranporestørrelse
Typiske porestørrelser er 0. 1, 0. 2 eller 0. 45 μ	Typiske porestørrelser er 0. 1, 0. 2 eller 0. 45 μm
Proteinbindende kapacitet Nitrocellulose har en proteinbindende kapacitet på 80 til 100 μg / cm
2 . PVDF har en proteinbindende kapacitet på 170 til 200 μg / cm	2 . Følsomhed
Dette har en lav følsomhed i forhold til PVDF.
Dette har en høj følsomhed.	Påvisning af lavt udtrykte proteiner
Da følsomheden er lav i nitrocellulosemembraner, er den ikke egnet til påvisning af lavt udtrykte proteiner.
Dette er mere egnet til påvisning af lavt udtrykte proteiner på grund af dets høje følsomhed.	Baggrundsstøj
Dette har lavere baggrundsstøj
Dette har højere baggrundsstøj.	Interaktioner med proteiner
Proteinmolekyler binder til nitrocellulosemembraner gennem hydrofobe interaktioner.
Proteiner binder til PVDF membraner gennem hydrofobe og dipol interaktioner.	Membranets natur
Nitrocellulose er skør og skrøbelig. Men versioner af nitrocellulose er tilgængelige, og de er resistente.
PVDF er mere holdbart og har højere kemikalieresistens.	Evne til at strippe og genbruge
Nitrocellulose kan have svært ved stripping og reprobing uden at miste signalet.
PVDF er ideel til reprobing og sequencing applikationer.	Egnethed
Nitrocellulose er ideel til at detektere proteiner med lav molekylvægt.
PVDF er mere egnet til at detektere proteiner med højere molekylvægt.	Andre anvendelser
Nitrocellulose kan anvendes til nukleinsyreanalyse og dot / slot-blotting.
PVDF kan anvendes til proteinsekvensering og fastfase-assaysystemer.	Omkostninger
Dette er billigere end PVDF membraner.
Dette er dyrere end nitrocellulose membraner.	Behov for forvædning
Nitrocellulosemembraner kræver ikke foruddækning med methanol
PVDF membraner kræver presoaking med methanol.	Sammendrag - Nitrocellulose vs PVDF

Nitrocellulose membraner var de første membraner, der blev anvendt kommercielt til lateral flow analyse. De har en høj kapacitet til absorption af proteiner. Derfor anvendes nitrocellulosemembraner i western blotting. PVDF er en anden type membran, der anvendes i western blotting, og den har også en høj proteinabsorptionskapacitet. Begge typer anvendes i western blotting til proteinanalyse. Imidlertid har PVDF membraner mere specielle egenskaber, hvilket gør dem mere egnede end nitrocellulosemembraner til western blotting. Men nitrocellulosemembraner er mere egnede til detektering af lavmolekylære proteiner, PVDF-membraner er mere egnede til detektion af højmolekylære proteiner. Dette er forskellen mellem nitrocellulose og PVDF membraner.

Image Courtesy:

1. "Western blot transfer" Af Bensaccount på engelsk Wikipedia (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia

Reference:

1. Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun og Thomas A. Neubert. "Anvendelse af nitrocellulosemembraner til proteinkarakterisering ved matrixassisteret laserdesorption / ioniseringsmassespektrometri. "Analytisk kemi. S. National Library of Medicine, 15. juli 2006. Web. 28. marts 2017

2. "Molekylære markører og plantebioteknologi. "Google Bøger. N. p., n. d. Web. 28. marts 2017

3. Mandag den 8. april 2013 Tweet. "Magic's In the Membrane: Vælg klogt for Best Western Blot Resultater. "Biocompare. N. p., 8. april 2013. Web. 28. marts 2017