Forskel mellem YAC og M13 Phage Vector | YAC vs M13 Phage Vector
Nøgleforskel - YAC vs M13 Fagvektor
DNA-kloning er en vigtig proces, der muliggør udbredelse af vigtige DNA-fragmenter af organismer. Det kræver sammenføjning af specifikt DNA med vektor-DNA til dannelse af rekombinant DNA, som transformerer til værtsorganismen. En vektor er et DNA-molekyle, der opfører sig som et vehikel til at bære fremmed genetisk materiale i en anden celle eller organisme. Det skal være i stand til at replikere inde i værtsorganismen og producere flere kopier af rekombinant DNA. Der er forskellige typer af vektorer, der anvendes i DNA-kloning. Gær kunstig kromosom (YAC) og M13 fagvektor er to typer blandt dem. Nøgleforskellen mellem YAC og M13 fagvektoren er, at YAC er et kunstigt kromosom, som replikerer i gærceller , mens M13 fagvektor er et enkeltstrenget cirkulært DNA af bakteriofag M13, som replikerer i E coli celler.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er YAC
3. Hvad er M13 Phage Vector
4. Side om side sammenligning - YAC vs M13 Phage Vector
5. Sammenfatning
Hvad er en YAC Vector?
YAC er et kunstigt bygget kromosom, som har evnen til at bære et stort segment af fremmed DNA og replikere i gærcellerne. Det har centromere, telomer og autonomt replikerende sekvenser, der er essentielle for replikation og stabilitet. YAC bør også bære en selektiv markør eller markører og restriktionssteder for at gøre den til en effektiv kloningsvektor. Store sekvenser fra 1000 kb til 2000 kb kan indsættes i YAC og overføres til gær.
Figur 01: YAC Vector
Hvad er M13 Phage Vector?
Bakteriofag M13 er et virus, som inficerer og replikerer i E Coli. Genomet af M13 bakteriofagen er lille i størrelse, ca. 6,7 kb. Det er et enkeltstrenget, cirkulært og positivt sans DNA. Denne virus inficerer specifikt E Coli bakterier gennem F pilus. Når den først kommer ind i ssDNA'et i bakterien, syntetiserer den dens komplementære streng og bliver dsDNA eller den replikative form (RF) af M13. RF kan opføre sig som et plasmid i værtsorganismen. DsDNA'en replikerer inden for E Coli og producerer ssDNA, der bærer nye fag. Disse nye fager frigives kontinuerligt fra E Coli uden at dræbe værtscellen. Infektionen nedsætter imidlertid væksten af E Coli. dsDNA kan ekstraheres fra bakterieceller og anvendes som vektorer i DNA-kloning.De er kendt som M13 fagvektorer. De kan let manipuleres og anvendes på samme måde som plasmidvektorer.
Den iboende evne til infektion af disse M13 fager tjener som en god kvalifikation til anvendelse som en vektor i genkloning. Ved udvikling af M13 i en vektor, skal flere elementer inkorporeres i dens genom. De er et gen for lac-repressor-proteinet (lac I), den operator-proximale region af lac Z -genet, en lac-promotor og et multiple kloningssted (polylinker). Når dsDNA fra M13 anvendes som vektorer, kan den behandles som en plasmidvektor. Anvendelsen af ssDNA M13 har imidlertid fordele ved DNA-sekventering og site-directed mutagenese.
Eftersom M13 fagvektor bærer flere kloningssteder i lacZ -regionen, kan rekombinerede vektorer let identificeres ved den blå / hvide koloniescreening på agarplader indeholdende IPTG og X-Gal. Blå plaques produceret på pladerne indeholder ikke de rekombinerede fager. Derfor kan fag med indsatser vælges til kloningsformålet.
Figur 02: Bakteriofag M13
Hvad er forskellen mellem YAC og M13 Phage Vector?
- diff Artikkel Mellem før tabel ->
YAC vs M13 Fagvektor |
|
| YAC er et genetisk konstrueret kromosom, der har evnen til at bære et stort segment af fremmed DNA og replikere i gærcellerne. | M13 fagvektor er en viral vektor udviklet af bakteriofag M13, som anvendes til at indsætte fremmed DNA i E Coli. |
| Formål | |
| YAC'er blev designet til at klone store fragmenter af genomisk DNA i gær. | M13 fagvektorer anvendes til at indsætte fremmed DNA i E Coli. |
| Indsæt længde | |
| YAC'er kan indeholde megabasestørrelsesgeneratorer (1000 kb - 2000 kb). | Størrelsen af indsatser er ca. 1, 500 bps. |
| Konstruktion | |
| YAC DNA er svært at rense intakt og kræver en høj koncentration til generering af YAC vektor system. | Det sker via cyklisk fotosyntetisk elektronkæde. |
| Stabilitet | |
| YAC er ustabil. | M13 phages kan let ekstraheres. |
| Størrelse | |
| Enzymer er større molekyler. | M13 fag er stabile end YAC. |
Sammendrag - YAC vs M13 Fagvektor
YAC er et kunstigt konstrueret vektorsystem under anvendelse af en specifik region af gærkromosom for at indsætte store segmenter af genetisk materiale til gærceller. M13 fagvektor er et vektorsystem afledt af bakteriofag M13, som bruger E coli som værtsorganismen. Dette er den største forskel mellem YAC og M13 Phage Vector. Begge er lige så nyttige i rekombinant DNA-teknologi og genkloning.
Reference:
1. ”Vektor. "Genetik-noter - Vector. N. p., n. d. Web. 16. maj 2017. // genetik-noter. Wikispaces. dk / Vector
2. "Gær kunstig kromosom. "Wikipedia. Wikimedia Foundation, 21. april 2017. Web. 16. maj 2017..
Image Courtesy:
1. "M13B" Af J3D3 - Egentligt arbejde (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia
