Forskel Mellem Gram Stain And Acid Fast | Gram Stain vs Acid Fast

Nøgleforskel - Gramfarve vs Acid Fast

Bakterier er meget små mikroorganismer. De er gennemsigtige, og deres påvisning er vanskelig under levende og uklare forhold. Således udvikles forskellige farvningsmetoder til at lette bakteriel detektion. Der er tre hovedtyper af farvningsteknikker: simple farvning, differentiel farvning og strukturel farvning. Differentiel farvning er en teknik, der bruger mere end en plet til at differentiere bakterier. Gram plet og syrefast plet er mest populært kendt som differentierede pletter. Gramfarvning er en differentiel farvningsteknik, som adskiller bakterier i to grupper, der er kendt som gram-positive bakterier og gramnegative bakterier. Den syrefaste plet er en differentiel plet anvendt til at identificere syrefaste organismer, såsom Mycobacterium, fra ikke-sure hurtige organismer. Dette er nøgleforskellen mellem Gram stain og Acid Fast stain.

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel

2. Hvad er Gram Stain

3. Hvad er Acid Fast

4. Ligheder mellem Gram Stain and Acid Fast

5. Sammenligning ved siden af hinanden - Gramfarve vs. Acid Fast i Tabular Form

6. Sammendrag

Hvad er Gram Stain?

Gramfarvning er en vigtig differentieret farvningsteknik anvendt til bakteriel identifikation i mikrobiologi. Denne teknik blev introduceret af den danske bakteriolog Hans Christian Gram i 1884. Gramfarvning kategoriserer bakterier i to hovedgrupper, der hedder gram positive og gram negative, hvilket er meget vigtigt i bakteriel klassificering og identifikation. Mikrobiologer udfører gramfarvning som et indledende trin i bakteriel karakterisering under deres studier.

Bakterier grupperes på baggrund af forskellene i deres cellevæg. Gram positive bakterier er sammensat af et tykt peptidoglycan lag i deres cellevæg, mens gram negative bakterier er sammensat af et tyndt peptidoglycan lag i deres cellevæg. Resultatet af gramfarvningen vil være baseret på forskellen i tykkelsen af peptidoglycanlaget af cellevæggen.

Gramfarvning udføres ved anvendelse af fire forskellige reagenser nemlig; primær plet, mordant, affarvningsmiddel og modfarve. Krystalviolet og safranin anvendes som henholdsvis primære og modflader, mens henholdsvis gram jod og 95% alkohol anvendes som henholdsvis mordant og decolourizer.De grundlæggende trin i gramfarvning er som følger;

Der fremstilles et bakteriel smear på en ren glasskinne, varme fikseres og afkøles.
Smør er oversvømmet med krystalviolet i 1 - 2 minutter.
Smøre skylles med langsomt løbende vand fra vandet for at fjerne overskydende pletter.
Gram iod påføres smøret i 1 minut.
Smøre skylles med langsomt ledende vand fra vandet.
Smøre vaskes med 95% alkohol i 2 - 5 sekunder og skylles med langsomt ledende vand fra vand.
Smør er skinnet farvet med safranin i 1 minut.
Smøre skylles med langsomt løbende vand fra vand, tørres og observeres under mikroskopet.

I slutningen af gramfarvningen vil gram negative bakterier blive observeret i lyserød farve, mens gram positive bakterier vil blive observeret i lilla farve.

Figur 01: Gram-negativ og Gram-positiv bakterier

Resultatet af gramfarvningen bestemmes af tykkelsen af peptidoglycanlaget i deres cellevæg. Under affarvningstrinnet fjernes primære pletter og mordanten let fra de gramnegative bakterier og bliver farveløse, da de har et tyndt peptidoglycanlag. Den primære farve bevares i de gram positive bakterier, da de har et tykt peptidoglycan-lag. Tællerfarven vil ikke være effektiv for grampositive bakterier på grund af tilbageholdelsen af den primære plet. Således vil gram positive bakterier være synlige i primær farvefarve, det vil sige lilla farve. Tællerfarven vil plette de gramnegative bakterier, og de vil være synlige i valgfarve, hvilket er safraninfarven. Derfor er det let at kategorisere bakterier i to grupper efter gramfarvning, og det er værdifuldt i bakteriedifferentiering og identifikation.

Hvad er Acid Fast?

Syrefasthed er en fysisk egenskab for visse bakterier, især deres resistens over for affarvning af syrer under farvningsprocedurer. Når de er farvet, modstår disse organismer fortyndet syre og eller ethanolbaserede affarvningsfremgangsmåder, der er almindelige i mange farvningsprotokoller. Således er navnet 'syresnabb' givet til disse organismer. Denne egenskab er vist på grund af at have et højt voksagtigt materiale (mycolic syrer) i deres cellevægge. Denne test er kritisk for identifikationen af Mycobacterium tuberculosis.

Figur 2: Acid Fast Mycobacteria

Denne sure fast plet blev udviklet af Paul Ehrlich i 1882. Ehrlichs syrefast teknik blev modificeret af Ziehl-Neelsen, og den bruges nu oftere. Acid-hurtig farvningsprocedure involverer tre forskellige reagenser. Carbol fuschin bruges som den primære plet. Syrealkohol anvendes som affarvningsmiddel. Methylenblå anvendes som modfarve. Farvningsproceduren udføres som følger.

Den primære plet (carbol fuchsin) påføres den faste prøve på diaset (Alle celler bliver farvet i rød farve).
Glideren opvarmes ved dampning i 5 minutter, som driver pletterne korrekt i cellerne.
Derefter tilsættes affarvningsopløsningen (dette fjerner det røde farvestof fra alle celler undtagen de sure raske bakterier).
Methylenblåt tilsættes som en modfarve (Det farver alle affarvede bakterieceller).
Acid-hurtige bakterier forbliver røde, mens ikke-sure hurtige bakterier pletter i blå.

Hvad er ligheden mellem Gram Stain and Acid Fast?

Gramfarvning og Acid fast er to differentiale farvningsteknikker.
Begge teknikker kategoriserer bakterier i to grupper.
Begge teknikker bruger to pletter og en affarvning.

Hvad er forskellen mellem gramfarve og syre hurtigt?

Gramfarvning er en differentiel farvningsteknik, som adskiller bakterier i to grupper Gram-positive bakterier og gramnegative bakterier.

Acid Hurtig plet er en differentiel plet anvendt til at identificere syrefaste organismer fra ikke-sure hurtige organismer.
Primærfarvning	Krystalviolet er den almindeligt anvendte primære plet i gramfarvning.
Carbol fuchsin er den primære plet, der anvendes i syre hurtigt.
Affarvningsmiddel	95% alkohol anvendes som et affarvningsmiddel i gramfarvning.
Acidalkohol anvendes som et affarvningsmiddel i syre hurtigt.
Counter Stain	Gram pletter anvender safranin som modfarven.
Acid-hurtig plet anvender methylenblåt som tællerfarven.
Observation	Gramnegative bakterier observeres i valgfarve, og gram positive bakterier observeres i lilla farve.
Acid Hurtige bakterier observeres i rød farve, og ikke-sure hurtige bakterier observeres i blå farve.
Sammendrag - Gramfarve vs Acid Fast	Visualisering af mikroorganismer i levende tilstand er vanskelig. Derfor anvendes biologiske pletter og farvningsprocedurer i vid udstrækning for at studere deres egenskaber. Differentiel farvning er en type farvningsteknik anvendt til at differentiere bakterier. Gramfarvning og syrefast plet er to differentielle farvningsteknikker. Gramfarvning differentierer gram negative bakterier og gram positive bakterier baseret på tykkelsen af deres cellevægge. Acid-hurtig farvning adskiller syrefaste bakterier fra ikke sure sure bakterier baseret på mycolsyreindholdet i cellevæggen. Dette er forskellen mellem sur hurtigt og gramfarve.

Download PDF Version af Gram Stain vs Acid Fast

Du kan downloade PDF-versionen af denne artikel og bruge den til offline formål som pr. Citat notat. Du kan downloade PDF-version her Forskellen mellem Gram Stain and Acid Fast.

Referencer:

1. Aryal, Sagar. "Acid-Fast Stain-Principle, Procedure, Interpretation and Examples. "Online Microbiology Notes. N. p., 08 maj 2017. Web. Tilgængelig her. 20. juli 2017.

2. Differentielle pletter til identifikation af bakterier: Gram, Acid-Fast & Endospore. N. p., n. d. Web. Tilgængelig her. 20. juli 2017.

Image Courtesy:

1. "Lymfeknude - Atypisk mykobakteriel infektion (MAI) - AFB stain" af Yala Rosen (CC BY-SA 2. 0) via Flickr