Forskel mellem SDS Page og Western Blot | SDS Page vs Western Blot

Nøgleforskel - SDS Page vs Western Blot

Western blotting er en teknik, der registrerer et specifikt protein fra en proteinprøve. Denne teknik udføres via flere centrale trin: gelelektroforese, blotting og hybridisering. Natriumdodecylsulfatpolyacrylamidgelelektroforese (SDS Page) er en slags gelelektroforese teknik, der anvendes til at adskille proteiner i overensstemmelse med deres størrelser (molekylvægte). Western blot er et specielt ark af en blottemembran, som bruges til at overføre det samme mønster af proteinerne i SDS-siden. Nøgleforskellen mellem SDS Page og Western blot er, at SDS Page tillader adskillelse af proteiner i en blanding , mens western blot tillader detektion og kvantificering af et specifikt protein fra en blanding. Begge er nyttige i proteinanalysestudier.

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel

2. Hvad er SDS Page

3. Hvad er Western Blot

4. Side om side sammenligning - SDS Page vs Western Blot

5. Sammendrag

Hvad er SDS-side?

SDS Page er en gelelektroforese teknik, der anvendes til proteinseparation. Det er almindeligt anvendt i biokemi, genetik, retsmedicin og molekylærbiologi. Når proteinerne er ekstraheret fra prøven, køres de på en gel bestående af SDS og polyacrylamid. SDS er et anionisk vaskemiddel, som anvendes til linearisering af proteiner (denatureringsproteiner) og til at give en negativ ladning til lineariserede proteiner, der er proportionale med deres molekylmasse. Polyacrylamid bliver den faste bærer til gelen. Denaturerede proteiner, der er negativt ladet migrere mod den positive ende af apparatet gennem gelen. I overensstemmelse med størrelsen af proteinerne varierer migrerende hastigheder blandt proteiner, og adskillelse forekommer. SDS-siden er derfor nyttig til adskillelsen af individuelle proteiner baseret på deres størrelser.

Fremstillingen af polyacrylamidgelen til fraktionering af proteiner er et afgørende skridt i SDS Page. Den korrekte koncentration af polyacrylamid og typen af det anvendte tværbindingsmiddel påvirker kraftigt gelens fysiske egenskaber, hvilket gør den egentlige adskillelse af de forskellige proteiner. Garnets porestørrelser skal styres ordentligt for effektiv separation. Imidlertid betragtes SDS Page som en højopløsningsproteinseparationsteknik.

SDS Page teknik har en stor begrænsning i proteinanalyse. Da SDS denaturerer proteiner forud for adskillelse, tillader det ikke detektion af enzymatisk aktivitet, proteinbindingsinteraktioner, proteinkofaktorer osv.

Figur 01: SDS Side

Hvad er Western Blot?

Western blotting teknik muliggør detektion af et specifikt protein fra en proteinblanding og måling af proteinets mængde og molekylvægt. Western blot er membranen, der anvendes under blottingsproceduren for at få spejlbilledet af proteinmønstrene i SDS-polyacrylamidgelen. Membranen, der anvendes til western blotting, består for det meste af nitrocellulose eller polyvinylidendifluorid (PVDF). Membranen med det overførte protein kan anvendes til at identificere det ønskede protein. Det kræver højkvalitets antistof til påvisning af det ønskede protein ved hybridisering. Antistoffet binder til dets specifikke antigen og afslører tilstedeværelsen af det ønskede antigen, som er et protein.

Overførsel af proteinerne fra SDS-polyacrylamidgelen til westernblottet udføres ved elektroblotting. Det er en effektiv og hurtig metode, der får proteinerne til at elektroforere ud af gelen og passere på nitrocellulosemembranen (western blot).

Figur 02: Western Blot

Hvad er forskellen mellem SDS Page og Western Blot?

- diff Artikel Mellem før tabel ->

SDS Side vs Western Blot
SDS Page er en gelelektroforese teknik.	Western blot er en teknik, der udføres på en membran for at detektere et specifikt protein fra en blanding.
Brug
SDS-side muliggør adskillelse af proteiner i henhold til deres størrelser.	Western blot tillader overførsel af proteiner på SDS side gel uden at ændre mønster og tillader hybridisering med specifikke antistoffer.
Ulemper
Protein denaturering, høj pris og tilstedeværelse af neurotoxin kemikalier er ulemperne ved denne teknik.	Denne teknik er tidskrævende og kræver gode erfarne personlige og specifikke kontrollerede forhold.

Sammendrag - SDS Page vs Western Blot

SDS side og western blot er to metoder involveret i proteinanalyse. SDS Page giver let adskillelse af proteiner på en gel i overensstemmelse med deres molekylvægt. Western blot hjælper med at bekræfte tilstedeværelsen og mængden af et specifikt protein gennem hybridisering med specifikke antistoffer. Dette er forskellen mellem SDS Page og Western blot.

Referencer:

1. Blancher, C. og A. Jones. "SDS-PAGE og Western Blotting Techniques. "Metoder i molekylær medicin. S. National Library of Medicine, n. d. Web. 27. marts 2017

2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig og David H. Petering. "Nativ SDS-PAGE: Højopløsningselektroforetisk adskillelse af proteiner med tilbageholdelse af native egenskaber, herunder bundet metalioner. "Metallomics: integreret biometal videnskab. U. S. National Library of Medicine, maj 2014. Web. 27. marts 2017.

Image Courtesy:

1. "SDS-PAGE Electrophoresis" Af Bensaccount på engelsk Wikipedia (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia

2. "Western blot 114A" Af Amanthabagdon - Egent arbejde (Public Domain) via Commons Wikimedia